形態學檢查對細菌鑒定的導航作用

　　細菌鑒定的原則之一就是用最少的試驗完成鑒定。細菌形態學檢查是最基本、簡單、快速的常規鑒定方法。細菌形態學包括細菌細胞形態學和細菌菌落形態學。細菌形態學正確描述依賴于方法、培養基、培養時間、染色試劑等，培養基和培養時間不同會影響細菌的形態。下面是小編精心整理的形態學檢查對細菌鑒定的導航作用，歡迎大家分享。

　　形態學檢查對細菌鑒定的導航作用

　　1、菌落特征觀察

　　細菌在固體培養基表面生長形成菌落。對菌落進行描述應包括菌落大小(分大、中、小，以1mm為界)、形狀、高度、邊緣、表面狀態、密度(透明度)、硬度(用接種環刮取菌落時的感覺)、菌落內部結構、顏色、光澤以及與培養基表面的黏附程度，還應包括菌落的溶血、氣味和色素產生情況等特性。觀察菌落特征的目的是為了對細菌進行初步鑒定。有些特征是某些細菌所特有的，具有屬或種的鑒別價值，如肺炎鏈球菌在綿羊血瓊脂平板上的臍窩狀菌落(如圖1所示)、伴放線凝集桿菌菌落特殊的內部結構(如圖2所示)、侵蝕艾肯菌的斗笠樣菌落、斯氏假單胞菌皺紋樣菌落、變形桿菌遷徙樣菌落、銅綠假單胞菌的水溶性色素、紫色色桿菌的脂溶性色素(如圖3所示)、粘質沙雷菌的紅色色素(如圖4所示)、產吲哚金黃桿菌產生的吲哚氣味、嗜血桿菌產生的鼠穴氣味、諾卡菌產生的腐土氣味、厭氧菌產生的腐氨氣味、熒光假單胞菌產生的黃色熒光素、某些厭氧菌可產生磚紅色熒光素等。有些細菌產生色素受到氣體的影響(粘質沙雷菌在厭氧環境下不產色)，有些細菌產生色素受到光線的影響(某些快速生長分枝桿菌是光產色或暗產色)。

　　對細菌菌落特征的觀察和描述是細菌鑒定的第一步驟，其主要目的體現在以下幾方面。

　　1.1 病原菌定量或半定量　在對標本進行定量或半定量接種后，通過菌落計數可獲得定量或半定量結果，細菌的定量在尿液分析和療效動態觀察中具有臨床意義，半定量適用于開放性標本的結果分析(確定優勢菌)。

　　1.2 確定病原菌　開放性標本受炎癥組織周圍皮膚、黏膜的常居菌叢污染的可能性較大，觀察培養結果時應根據標本直接涂片鏡檢結果，結合菌落形態特征來確定病原菌。

　　1.3 解釋血培養鏡檢結果　分析陽性血培養瓶的轉種結果時，應結合對陽性培養液直接涂片的鏡檢結果，如果涂片結果與培養結果不符，應考慮操作錯誤或是污染所致。

　　1.4 確定鑒定方向 根據不同培養基上的菌落形態特征，結合革蘭染色鏡檢結果及快速輔助試驗(氧化酶、觸酶、凝固酶等)結果，可確定鑒定方向。

　　2、菌體形態觀察

　　革蘭染色細胞形態學是細菌分類學的基礎，臨床微生物學實驗室仍然使用細胞形態學的方法進行細菌鑒定，掌握細胞形態學的標準方法能夠為準確鑒定細菌提供可靠保證。對細菌菌體形態特征的觀察和描述是細菌鑒定的第二步驟，其主要目的體現在以下幾方面。

　　2.1 解釋培養結果、確定鑒定方向 無論是液體培養(如血培養、標本直接增菌培養)或是固體培養(接種瓊脂平板)，都應該將培養物進行涂片、染色鏡檢確定培養物的性質，即可快速報告，也是為下一步的鑒定指明方向。圖5所示為血培養陽性培養物涂片革蘭染色鏡檢結果。

　　2.2 鑒別細菌的手段 細菌菌體形態結合菌落形態特征可對細菌進行鑒別。例如，在選擇性巧克力平板(加萬古霉素)上生長的草綠色溶血菌落，是乳桿菌還是腸球菌(VRE)只要涂片鏡檢就很容易區分;鮑曼不動桿與克雷白菌屬細菌的菌落形態相似，區別在于前者為革蘭陰性球桿菌(接近球菌)，后者為革蘭陰性桿菌;丹毒絲菌在血平板上的菌落形態與草綠色鏈球菌很相像，但鏡下形態差別很大。圖6所示為紅斑丹毒絲菌的革蘭染色鏡下形態。

　　2.3 鑒定方向及試劑選擇的依據 葡萄球菌和鏈球菌、革蘭陽性球菌和革蘭陽性桿菌、革蘭陰性球菌和革蘭陰性桿菌的鑒定方向均不同，鑒定試劑選擇也不同。

　　2.4 藥敏組合選擇的依據　CLSI文件規定，每一種細菌都有一定的抗菌藥物組合供選擇。要準確進行藥敏組合選擇，就必須有準確的細胞形態學結果作支持。

　　3、菌體特殊結構的觀察

　　3.1 莢膜 莢膜是某些細菌在細胞壁外包裹的一層粘液性物質，不同的細菌其莢膜成分也有一定差異，一般由多糖、多肽或蛋白質組成。莢膜作為細菌的毒力因子有必要對其染色觀察，但莢膜染色對于臨床標本分離菌株的鑒定價值并不大。圖7所示為大腸埃希菌莢膜染色結果。

　　3.2 鞭毛 觀察細菌鞭毛對于細菌鑒定具有重要的價值。依據鞭毛位置和數量，細菌分為單端極鞭毛菌、單端雙鞭毛菌、單端叢鞭毛菌、周鞭毛菌、側鞭毛菌。鞭毛是細菌的動力器官，大多數情況下可用動力試驗驗證細菌鞭毛的存在，但動力試驗無法代替鞭毛染色在細菌鑒定中的地位。圖8所示為霍亂弧菌鞭毛染色結果。

　　3.3 芽胞 芽胞的形態包括芽胞形狀、芽胞位置和孢子囊膨大。芽胞形態分為圓柱形、橢圓形、球形，芽胞位置分為端生、近端生、中生或近中生。根據芽胞的形態學可以進行芽胞桿菌屬和梭菌屬的鑒定。芽胞染色并不優于革蘭染色，使用相差顯微鏡觀察芽胞優于芽胞染色和革蘭染色。圖9所示為艱難梭菌芽胞染色結果。

　　3.4 異染顆粒 其主要成分是多聚偏磷酸鹽，可隨菌齡的延長而變大。多聚磷酸鹽顆粒對某些染料有特殊反應，產生與所用染料不同的顏色，因而得名異染顆粒。如用甲苯胺藍、次甲基藍染色后不呈藍色而呈紫紅色。棒狀桿菌和某些芽胞桿菌常含有這種異染顆粒。白喉棒狀桿菌異染顆粒位于菌體兩端，故又稱極體，有助于該菌的鑒定。圖10所示為白喉棒狀桿菌異染顆粒染色結果。

　　綜上所述, 臨床微生物學實驗室常規鑒定細菌離不開形態學檢查,很難想象革蘭染色和形態學檢查錯誤會得到正確的鑒定結果，形態學檢查對鑒定細菌起著“導航”作用，具有重要的價值，臨床微生物學檢驗工作者應予重視。

　　細菌鑒定步驟

　　在實驗室中，主要是根據所用的鑒定儀器特點、感染性疾病的類型、標本種類、采集部位等因素建立具體的微生物學檢驗程序。大致步驟如下。

　　1．獲得被鑒定菌種的純培養菌落。

　　2．確定染色（革蘭染色、抗酸染色）、形態和排列，按科、屬、種依次鑒定下去。

　　3．運用知識、經驗、最小數量的試驗方法做出鑒定。

　　細菌鑒定方法

　　1．生化鑒定

　　是細菌鑒定中最重要的一種，主要是借助細菌對營養物質分解能力的不同及其代謝產物的差異對細菌進行鑒定，包括蛋白質分解產物試驗、觸酶試驗、糖分解產物試驗、氧化酶試驗、凝固酶試驗等。

　　2．血清學鑒定

　　適用于含較多血清型的細菌，常用方法是玻片凝集試驗，并可用免疫熒光法、協同凝集試驗、對流免疫電泳、間接血凝試驗、酶聯免疫吸附試驗等方法快速、靈敏地檢測樣本中致病菌的特異性抗原。用已知抗體檢測未知抗原（待檢測的細菌），或用已知抗原檢測患者血清中的相應抗細菌抗體及其效價。血清學鑒定操作簡單快速，特異性高，可在生化鑒定基礎上為細菌鑒定提供確定診斷。

　　3．分子生物學檢測

　　適用于人工培養基不能生長、生長緩慢及營養要求高不易培養的細菌，檢測方法包括核酸擴增技術、核酸雜交、生物芯片及基因測序等。常見的核酸擴增技術有聚合酶鏈反應、連接酶鏈反應等，主要用于耐甲氧西林、結核分枝桿菌等病原菌的檢測。核酸雜交有斑點雜交、原位雜交等，用于致病性大腸埃希菌、沙門菌、空腸彎曲菌等致病菌的檢測。生物芯片包括基因芯片和蛋白質芯片，主要是對基因、蛋白質、細胞及其他生物進行大信息量分析的檢測技術。

　　4．微生物自動鑒定系統鑒定

　　可快速、準確地對臨床近千種常見分離菌進行鑒定，目前已在臨床實驗室廣泛使用。其中，細菌16S rRNA編碼基因已成為較理想的基因分離靶序列，逐漸成為臨床細菌鑒定、分離的金標準。

　　5．質譜技術

　　是近年來發展起來的一種新型的軟電離生物質譜，用于分析細菌的化學分類和鑒定，具有高靈敏度和高質量檢測范圍的優點。主要是對核酸、蛋白質、多肽等生物大分子串聯質譜進行分析。

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