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    ?我們首先將    nsclc    患者分為i級至iii級和i級至iv級的不同亞組，如補充圖2a-f所示，在相同病理分級下，低表達    hlf    的    nsclc    患者的無進展生存期較高表達    hlf    的患者短。相應的，根據多個獨立數據集，包括我們的樣本(補充圖2g和h)，tcga（補充圖2i和j），ae-meta(補充圖2k和l)和k-m    plotter(補充圖2m?o)，在相同臨床階段的    nsclc    患者中也有類似的發現。

    ?綜上所述，我們的研究結果表明，低表達    hlf    與    nsclc    患者的早期進展和晚期臨床病理特征顯著正相關。

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    ?進一步研究發現，在    nsclc    患者中，hlf    下調與較短的局部無復發生存期和遠處無轉移生存期呈正相關(補充圖3a-d)。同樣，低表達    hlf    的    adc    患者以及    sqc    患者(補充圖3i-l)的局部無復發生存期和遠處無轉移生存期較差(補充圖3e-h)。以上結果說明，低表達hlf促進nsclc早期局部復發和多器官遠處轉移。

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    ?為了進一步確定    hlf    在    nsclc    細胞局部肺定植和遠處轉移中的作用，首先在多個不同亞型的    nsclc    細胞株中檢測了    hlf    的表達。

    ?如補充圖4a和b所示，與非癌永生化肺支氣管上皮細胞    beas-2b    和正常肺成纖維細胞    wi-38相比，nsclc    細胞中    hlf    的    mrna    和蛋白質水平差異下調。我們進一步構建了    hlf    過表達的    nci-h1975(h1975)和    nci-h520(h520)肺癌細胞，這些細胞表達所有    nsclc    細胞系中hlf水平最低，并內源性下調    nci-h460(h460)和    nci-h1299(h1299)細胞    hlf    的表達，這兩種細胞均表達最高的內源性    hlf    水平(補充圖4c和d）。

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    ?采用小鼠尾靜脈模型研究nsclc細胞的肺定植和生長能力。如圖3a-d和補充圖4e，上調    hlf    顯著抑制    h1975    細胞在肺中的腫瘤發生，表現為肺結節的形成減少，每m㎡的癌細胞數量減少，累積生存率延長。相反，沉默    hlf    對    h460    細胞有相反的效果(圖3a-c、e和補充圖4e)。

    ?值得注意的是，hlf    表達的改變不僅影響大肺結節的形成(在分析的腫瘤切片中定義為>50腫瘤細胞)(圖3b)，但也影響小肺結節的形成(在分析的腫瘤切片中定義為5-50個腫瘤細胞)(補充圖4e)，這支持了    hlf    在腫瘤細胞的早期定植和隨后的肺內生長中都起著重要作用的觀點。

    ?最后，與實驗結束時相比，在注射    hlf    穩定過表達的    h1975    細胞和下調    h460    細胞的小鼠腫瘤組織中，進一步證實了相應的高和低表達水平(補充圖4f)。

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    ?然后，采用體內左心室接種小鼠模型檢測    hlf    對    nsclc    遠處轉移能力的影響，將載體/nci-h1975、hlf    過表達    nci-h1975、載體/nci-h460    和    hlfsh#1/nci-h460    細胞接種到小鼠左心室。

    ?接種細胞6周后，收集小鼠的脛骨、腦、肝組織，并進行    h&e    染色處理。如圖所示。圖3f-i和補充圖4g，我們在與載體組相比，過    hlf    表達小鼠組中，包括骨、大腦和肝臟等遠處器官檢測到較少的轉移性腫瘤，以及較長的累積存活期延長。

    ?相比之下，沉默hlf可顯著增強骨、腦和肝臟轉移瘤的形成，并縮短生存期(圖3f-i和補充圖4h)。

    ?因此，這些結果表明，低表達    hlf    的    nsclc    細胞具有更強的局部定植和生長能力，以及更強的遠處轉移能力。

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    ?我們利用cck-8、集落形成和an連接素凋亡進一步研究了    hlf    在    nsclc    中的生物學功能，發現在正常培養條件下，hlf    對    nsclc    細胞的增殖和凋亡能力沒有顯著影響(補充圖5a–c)。

    ?我們的結果顯示，上調    hlf    會增加培養液的ph水平，而沉默    hlf    會降低培養基的ph水平，但正常情況下    hlf    并不影響    nsclc    細胞的表型和數量(補充圖5d)。

    ?低表達    hlf    可能通過營養代謝途徑促進    nsclc    細胞對低營養狀態的適應，因為即使在正常的含氧條件下，癌細胞也更傾向于通過厭氧途徑代謝。

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