772.反向輸出-《最終診斷》
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?基質硬化調節 ec 增殖、血管生成、血管生長和分支,為了研究這種聯系,我們評估了 lm 中的脈管系統,并觀察了基質硬度和 cd31 血管面積之間的相關性(圖h)。當在凝膠內培養時,允許成纖維細胞重塑基質,mafs 誘導 ec 發芽的程度顯著高于cafs(圖i-k)。因此,maf 支持伴隨局部 ecm 重塑的細胞因子產生血管生成。
4、腎素-血管緊張素系統抑制目標成纖維細胞
?對新鮮分離的 maf 與肝源性成纖維細胞的 qpcr 分析顯示 ras 系統的所有關鍵成分(血管緊張素原[agt]、腎素[ren]、血管緊張素轉化酶[ace]和at-1[agtr1]的表達顯著增加)。此外,mafs 表達的 agt 和 agtr1 水平顯著高于cafs(圖l-o)。為了表征 ras 靶向對 maf 功能的影響,我們在用氯沙坦(一種at-1阻滯劑)或卡托普利(一種ace抑制劑)治療后進行了凝膠收縮試驗。在低濃度(氯沙坦為1mm,卡托普利為5mm)和高濃度(氯沙坦為10mm,卡托普利為 50mm)時,兩者都顯著降低了 maf 凝膠收縮(圖p-r)。
5、ras 抑制降低轉移基質硬度并重塑微環境
?與無高血壓組和非 ras 治療組2相比,接受抗 ras 藥物治療的患者組織硬度顯著降低(圖a-b)。進一步評估(通過對同一患者組中的col-1、asma 和 pmlc2 染色)是否可以通過 maf 激活的下調來解釋轉移剛度的差異。雖然高血壓與 pmlc2 染色的增加相關,但我們沒有觀察到對asma 和 col-i 的影響(圖c-h)。在所有組中,抗 ras 治療顯示 maf 激活和 ecm 沉積顯著減少(圖c-h)。抗ras藥物的作用獨立于特定的 ras 抑制治療。觀察到轉移僵硬(不同條件±高血壓±抗ras藥物)與col-i、asma和p-mlc2表達之間呈正相關(圖i-k),表明maf激活水平有助于組織僵硬在lm。總之,接受抗 ras 治療的患者顯示出低肌成纖維細胞/ecm 特征,這解釋了轉移硬化的減少。
6、at1r 信號轉導通過 rhoa 介導 maf 激活
?接下來,作者想確定 ras 抑制如何導致 maf 激活減少。體外用氯沙坦或卡托普利處理 maf 表明 lox 和 col1a1 mrna 表達降低(圖a-b)。p-mlc2 在 ras 抑制后也顯著減少(圖c-d)。氯沙坦和卡托普利治療顯著降低了 arhgef1 的酪氨酸磷酸化,并導致活性 rhoa 減少(圖e-h)。類似地,arhgef1 的敲低導致 p-mlc2 減少,支持血管緊張素-arhgef1-rhoa 軸在 maf 中的作用(圖i-j)。總的來說,我們結果表明 ras 通路抑制劑通過抑制 maf 主動收縮(圖k)以及減少膠原蛋白生成和交聯來阻止基質硬化,從而改善腫瘤纖維化過程。
7、ras 抑制增加了貝伐單抗的抗血管生成作用
?基質硬度不受單獨貝伐單抗治療的影響(圖a-b)。在 bev-組中,與非 ras 治療的高血壓患者和無高血壓患者相比,抗 ras 治療導致組織硬度降低(圖a,c)。類似地,在 bev 組中,在抗 ras 治療的患者中也觀察到了相同的基質硬度降低(所有p<0.001)(圖a,d)。此外,抗 ras 治療組的硬度降低與特定治療無關。單獨的貝伐單抗治療不影響 lm 內的 col-i、asma 和 p-mlc2。為了評估抗血管生成治療(貝伐珠單抗治療)和ras 抑制對血管系統的綜合影響,我們測量了一大群 crc lm 中的血管密度。與 bev-組相比,bev+組的血管密度顯著降低了48.7%± 8.2%。然而,與非ras、bev+治療相比以及與所有 bev-組。這與使用的 ras 治療類型無關。因此,抗 ras 藥物靶向組織硬度,從而影響貝伐單抗的療效。
8、通過 ras 和血管生成抑制減少 ec 增殖
? ec 增殖隨硬度增加而增加,vegf 進一步誘導增殖,低硬度時 vegf 效應最高(圖a-c)。此外,我們分析了在不同密度的纖維蛋白原基質(剛度的代表)中存在或不存在 vegf 的情況下 ec 發芽。ec發芽(芽的數量和長度)隨密度增加。vegf 導致在所有條件下進一步發芽,vegf 在軟基質中的作用更顯著,如 ec 增殖的情況。
?為了了解抗 ras 藥物和貝伐單抗的組合如何影響轉移灶內的 ec,我們量化了它們對 ec 增殖的影響。單獨的貝伐單抗治療導致 ec 增殖減少 56.1%±11.0%。由于轉移僵硬與獨立于治療的轉移內的 ec 增殖相關,我們評估了 ras 抑制是否足以減少 ec 增殖。在未接受抗血管生成治療的患者中,ras 抑制并未顯著降低 ec 增殖;然而,在接受貝伐單抗和抗 ras 藥物治療的患者中,ec增殖進一步降低了 78.1%±9.2%)。
9、ras 和血管生成抑制改善血管完整性
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