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    接下來，為了研究持續性嗜酸性粒細胞增多對體內轉移的長期影響，我們利用了cd3δ-il-5轉基因(il-5tg)小鼠，如圖2a所示骨髓中產生了非常高水平的嗜酸性粒細胞，并維持在外周血中。通過尾動脈注射腫瘤細胞將腫瘤細胞輸送到髂總動脈下游的器官，主要在下脊柱和后肢中高頻發生骨轉移。與wt    小鼠中較少的脊柱轉移相反，我們在il-5    tg小鼠中觀察到更多可見的色素性脊柱病變。

    據報道，腫瘤細胞的尾靜脈注射很少導致骨轉移。然而，除了更多的脊柱轉移數量外，il-5    tg小鼠的轉移風險顯著更高。在脛骨和股骨中也證實了類似的結果。股骨的組織學檢查顯示    il-5    tg小鼠的早期定植和明顯的腫瘤病灶。

    鑒于il-5    已被證明通過調節多種宿主細胞來支持轉移，包括嗜酸性粒細胞、調節性t    細胞、自然殺傷細胞、巨噬細胞和中性粒細胞，我們接下來確定了骨轉移增加和嗜酸性粒細胞的聯系。為此，我們將    il-5    tg小鼠與    eos-null    小鼠交叉以消除嗜酸性粒細胞。然后，我們用wt、il-5tg、il-5tg和eos-null小鼠的bm重建輻照wt小鼠，以排除bm基質細胞對骨轉移的貢獻。注射腫瘤細胞后，接受來自il-5    tg和    eos-null供體的    bm的嵌合小鼠沒有表現出轉移數量和腫瘤負荷的增加。這些結果證實嗜酸性粒細胞增多對于增加il-5tg    小鼠的骨轉移是必不可少的。

    3.嗜酸性粒細胞直接支持腫瘤細胞遷移和轉移形成

    鑒于觀察到il-5tg小鼠早期骨轉移增強，我們研究了嗜酸性粒細胞是否能直接促進腫瘤細胞的生存和生長。我們研究了嗜酸性粒細胞是否可以直接促進腫瘤細胞的存活和生長。通過進行體外實驗，在不存在嗜酸性粒細或存在嗜酸性粒細胞的情況下培養腫瘤細胞，我們發現腫瘤細胞的克隆活性沒有明顯改變?？紤]到嗜酸性粒細胞可能會誘導腫瘤細胞凋亡和壞死，我們評估了與嗜酸性粒細胞共培養的腫瘤細胞的存活率。沒有發現嗜酸性粒細胞對腫瘤細胞死亡的顯著影響。類似的發現表明，有或沒有嗜酸性粒細胞，edu陽性增殖腫瘤細胞的比例沒有明顯差異，腫瘤細胞的細胞周期也沒有變化。這些結果表明嗜酸性粒細胞對改變腫瘤細胞生長沒有實質性影響。

    隨后，我們在體外進行了遷移實驗。在培養過程中，與嗜酸性粒細胞直接或間接接觸后，腫瘤細胞的遷移能力顯著增強，提示嗜酸性粒細胞以接觸無關的方式促進腫瘤細胞的遷移。用來從il-5    tg小鼠和對照小鼠的bm上清液進行遷移試驗，研究結果表明，嗜酸性粒細胞來源的因子可能促進腫瘤細胞遷移。

    我們將腫瘤細胞與嗜酸性粒細胞混合，然后將混合物靜脈內共注射到wt    小鼠中，與單獨注射腫瘤細胞相比，這導致肺轉移增加。在平行實驗中，嗜酸性粒細胞在腫瘤細胞靜脈注射后立即被過繼轉移（氣管內），這導致了類似的結果。

    接下來我們研究了嗜酸性粒細胞與癌癥患者轉移之間的關系。與非癌癥患者的胸腔積液相比，胸膜轉移患者的惡性胸腔積液(mpe)檢測到更多的嗜酸性粒細胞(圖4，a和b)，其他免疫細胞包括巨噬細胞、淋巴細胞和中性粒細胞沒有變化。

    4.ccl6在嗜酸性粒細胞誘導的腫瘤細胞遷移和嗜酸性粒細胞依賴的轉移形成中至關重要

    我們的目的是確定嗜酸性粒細胞促進腫瘤細胞遷移和轉移形成的有效因素。既往研究報道ccl2、ccl3、ccl5、ccl6、ccl8、cxcl12、cxcl14等細胞因子和趨化因子直接或間接靶向腫瘤細胞促進轉移。我們采用實時定量聚合酶鏈反應(rt-qpcr)從il-5tg小鼠和wt小鼠的bm細胞中篩選一組細胞因子和趨化因子。ccl6是il-5    tg小鼠中最豐富的細胞因。由于ccl23已被確定為小鼠ccl6的人類同源基因，我們隨后評估了人類樣本中的ccl23水平，并發現相對于非癌癥患者的胸腔積液，mpe中ccl23濃度增加(圖4d)。此外，ccl6的高分泌主要在嗜酸性粒細胞中發現(圖4e)。為了確定嗜酸性粒細胞衍生的ccl6    是否參與腫瘤細胞遷移和轉移，我們產生了    ccl6    敲除小鼠（ccl6    ?/?）并將它們與    il-5    tg    小鼠（il-5    tg    和    ccl6    ?/?）雜交。相對于    il-5    tg    小鼠，il-5    tg    和ccl6    ?/?小鼠的嗜酸性粒細胞的基礎數量沒有差異。分離來自    il-5    tg    小鼠的    eos    和來自il-5    tg    和    ccl6    ?/?小鼠的eos    ccl6    ?/?兩種類型的嗜酸性粒細胞以進行體外遷移測定，值得注意的是，向    eos    ccl6    ?/?遷移的腫瘤細胞的數量減少了。

    嗜酸性粒細胞或ccl6缺失不影響體內基線肺轉移(圖s10，c和d)，而嗜酸性粒細胞ccl6缺失顯著減少嗜酸性粒細胞依賴性肺轉移。與il-5tg小鼠相比，il-5tg和ccl6/小鼠通過尾動脈注射腫瘤細胞后骨轉移也少得多。此外，靜脈注射腫瘤細胞后，在ccl6缺乏的il-5tg小鼠中，骨轉移數的增加和腫瘤負荷均有所降低?？傊?，這些觀察結果表明ccl6在體內對嗜酸性粒細胞誘導的腫瘤細胞遷移和嗜酸性粒細胞依賴的轉移形成至關重要。

    5.抑制ccl6受體ccr1可減輕腫瘤細胞遷移和轉移的形成
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